Apa Itu Spektrofotometer Nano

Halo sobat lab, bagaimana kabarnya hari ini? Semoga dalam keadaan sehat semua ya. Sobat Lab tahu ga sih apa itu Spektrofotometer ? Nah pada artikel kali ini penulis memiliki artikel yang berjudul : “Apa Itu Spektrofotometer Nano“. Semoga bisa bermanfaat dan bisa menambah ilmu pengetahuan kita semua.

PT. Andaru Persada Mandiri adalah distributor alat laboratorium yang memberikan solusi lengkap layanan terintegrasi. Andaru menjual berbagai alat laboratorium, memberikan layanan installasi, training pengguna, service, maintenance dan kalibrasi alat laboratorium. Bagi anda yang membutuhkan alat laboratorium bisa menghubungi kami via whatsapp 087777277740 atau telepon 0251-7504679. Yuk kita mulai pembahasannya!

Dengan spektrofotometer NanoDrop, mengukur konsentrasi sampel DNA, RNA, atau protein semudah mengklik pipet, menekan tombol, dan dibersihkan.

Inilah yang perlu Anda ketahui tentang kekuatan dan keterbatasan spesifikasi praktis ini, dan panduan singkat tentang cara menggunakannya.

Apa itu Spektrofotometer Nano?

Spektrofotometer Nano adalah instrumen laboratorium umum yang dapat mengukur konsentrasi DNA, RNA, dan protein dalam tetesan 1-2µL. Volume sampel yang kecil berarti lebih sedikit waktu persiapan dan pembersihan dan memungkinkan anda mengukur beberapa sampel dalam waktu kurang dari satu menit dibandingkan dengan menggunakan kuvet 1 cm tradisional.

Nilai konsentrasi dilaporkan dalam ng/µL untuk DNA dan mg/mL untuk protein.
Ingat : 1 ng/µL = 1 µg/mL = 1 mg/L

Jadi, spektrofotometer Nano sangat dianjurkan untuk sebagian besar aplikasi laboratorium. Lebih baik lagi, jika Anda mengukur lebih dari 96 sampel sekaligus untuk (katakanlah) microarray, genotyping, atau untuk dikirim ke fasilitas eksternal.

Baca juga : promo alat laboratorium

Cara Menggunakan Spektrofotometer NanoDrop

Mari mundur selangkah. Sudah menjadi hal yang lumrah bagi laboratorium untuk mulai memproses set sampel mereka lalu mengirimkan DNA, RNA, atau protein yang diekstraksi ke kolega atau layanan inti. Mampu secara konsisten memverifikasi hasil dan kemurnian sampel anda sendiri adalah keterampilan yang mudah namun mendasar untuk dikuasai.

Jadi, apakah Anda akan memulai pemeriksaan sampel pertama, keseratus atau lebih, berikut cara melakukannya dengan spektrofotometer Nano:

1. Buka perangkat lunak yang terhubung dengan spektrofotometer Nano.
2. Pilih aplikasi yang Anda inginkan (DNA, RNA, atau protein).
3. Angkat perlahan lengan berengsel yang tergantung secara horizontal pada instrumen.
4. Perhatikan titik gelap kecil; itu adalah tumpuan tempat Anda akan meletakkan sampel.
5. Bersihkan dan gosok alas dengan lembut menggunakan lap bebas serabut.
6. Pipet 1-2 µL larutan blanking Anda.
7. Turunkan lengan dengan lembut.
8. Klik “Ukur kosong/blank”.
9. Angkat lengan dan bersihkan dengan lap bebas serabut.
10. Ulangi langkah 6 sampai 9 mengganti larutan blanking dengan sampel.

Ini cukup sederhana, terutama setelah beberapa langkah pertama. Beritahu sumber sampelnya: DNA, RNA atau Protein.

Sekilas Tentang Spektrofotometer Nano

Spektrofotometer Nano melakukan pekerjaan yang sangat baik dalam mengukur spektrum luas yang mencakup sinar UV dan visible. Namun, tidak dapat secara otomatis menentukan bahwa sampel pada tumpuan adalah DNA, RNA, atau protein. Anda harus memberi tahu perangkat lunak informasi ini sebelum melakukan pengukuran sehingga dapat melaporkan konsentrasi yang akurat.

Meskipun jika mengalami keadaan di mana telah mengukur setengah dari sampel RNA pada pengaturan default (DNA untuk kami), dapat memulai lagi dengan membaca ulang setiap sampel pada pengaturan perangkat lunak yang benar.

Alternatifnya, Anda dapat memperkirakan konsentrasi sampel dengan tangan, berdasarkan data absorbansi mentah yang telah dikumpulkan menggunakan Tabel 1 di bawah sebagai panduan. Ingatlah untuk mengoreksi TE kosong (tris—EDTA) atau sampel air Anda!

Harap diperhatikan bahwa ini adalah untuk sampel murni DNA, RNA, dan protein dengan rasio A260/280 masing-masing sekitar 1,8, 2,0, dan 0,6. Selain itu, konsentrasi sampel akan dilaporkan dalam ng/µL. Dan jika tidak diketahui, A260 dan A280 hanya menunjukkan nilai serapan pada panjang gelombang masing-masing 260 nm dan 280 nm.

Baca juga : validasi metode hplc untuk analisis farmasi

Karena perbedaan jumlah ikatan rangkap karbon-karbon dalam asam nukleat dan protein, asam nukleat memiliki serapan maksimum pada 260 nm dan protein memiliki serapan maksimum pada 280 nm. Spektrofotometer Nano memberi tahu rasio A260/280 sehingga dapat menilai kualitas sampel.

Substances	Ratio A260/A230	Ratio A260/A280	A340
Optimum from Literature	2.3-2.4	1.7-2.0
DNA	2.31	1.80	0.04
DNA + 0.4M guanidine HCL	1.48	1.74	0.04
DNA + 0.4M sodium acetate	1.12	1.76	0.04
DNA + 0.2% BSA	0.45	1.44	0.10
DNA + 0.05% Phenol	2.00	1.59	0.01
DNA + 0.1% starch	2.12	1.67	0.66

Pump It Up: Waspadai Ekstraksi Sampel yang Cepat dan Kotor

Terlepas dari metode kuantifikasi, ada dua pertanyaan penting untuk ditanyakan setelah setiap ekstraksi asam nukleat:

1. Apakah ada kontaminasi dalam tube sampel saya?
2. Jika ada, jenis apakah itu?

Dari apa yang dapat dibaca sebagai sampel DNA murni berdasarkan rasio A260/280 saja, spektrofotometer Nano mungkin melebih-lebihkan hasilnya. Ini adalah hasil yang umum untuk sebagian besar spektrofotometer: peralatan melakukan apa yang dirancang untuk dilakukannya dan itu hanya membaca absorbansi pada panjang gelombang tertentu.

Tapi DNA bukan satu-satunya benda yang menyerap pada 260 nm. RNA juga demikian. Fenol mendekati sekitar 270 nm dan semua gabungan ini memiliki potensi untuk meningkatkan konsentrasi yang Anda laporkan.

Rasio Penyerapan Dapat Membantu Mengatasi Masalah

Rasio A260/280 dapat membantu memecahkan masalah kontaminasi sampel. Hal lain yang perlu diperhatikan adalah nilai A260/230, yang seperti mitra rasio A260/280-nya harus mendarat di atau di atas 1,8 untuk DNA dan di atas 2,0 untuk RNA (sebagai aturan praktis).

Berikut adalah beberapa petunjuk umum untuk membantu menginterpretasikan rasio absorbansi untuk skenario umum:

• Rasio A260/280 rendah atau puncak besar pada A280 : kontaminasi protein pada asam nukleat;
• Tinggi A230 : kontaminasi fenol, EDTA, atau karbohidrat;

Puncak kecil atau absorbansi yang lebih tinggi dari yang diharapkan di sepanjang sisi paling kanan grafik : kontaminasi yang berasal dari transfer antarmuka selama langkah pemisahan fasa dalam ekstraksi.

Salah satu cara untuk memastikan sampel yang lebih bersih adalah dengan mengirimkannya ke presipitasi ulang , diikuti dengan pencucian etanol, pengeringan udara yang diperpanjang, dan suspensi ulang dalam volume baru TE atau air murni.

Ya, konsentrasi yang dilaporkan mungkin jauh lebih sedikit dari sebelumnya, tetapi itu karena telah berhasil menghilangkan kontaminasi yang memengaruhi data absorbansi menjadi lebih baik atau lebih buruk.

Catatan : Nilai dalam ng/µL sesuai dengan pembacaan yang diambil untuk DNA beruntai ganda dalam mode pedestal. Nilai dalam mg/mL sesuai dengan pembacaan yang diambil untuk albumin serum sapi murni (BSA) dalam mode pedestal menggunakan fungsi A280.

Ditulis Oleh : SR

Demikian pembahasan tentang “Apa Itu Spektrofotometer Nano“. Bagi anda yang membutuhkan diskusi cepat produk ini bisa menghubungi contact PT. Andaru Persada Mandiri via whatsapp 087777277740 atau telepon 0251-7504679. Link alamat kami sertakan pada Google Maps.