Pengujian BaP pada Makanan Menggunakan HPLC

Pengujian BaP – Jika pada artikel sebelumnya kita sudah bahas tentang BaP pada Makanan maka sekarang kita akan bahas bagaimana Pengujian BaP pada Makanan Menggunakan HPLC. Benzo(a)pyrene (BaP) merupakan salah satu senyawa dari golongan Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAH) yang bersifat karsinogenik dan berbahaya bagi kesehatan manusia. Senyawa ini umumnya terbentuk akibat proses pembakaran tidak sempurna bahan organik, seperti pada proses pemanggangan, pengasapan, atau penggorengan makanan pada suhu tinggi.

Keberadaan BaP dalam makanan menjadi perhatian penting dalam bidang keamanan pangan karena dapat membahayakan kesehatan manusia, seperti meningkatkan risiko kanker jika terakumulasi dalam tubuh. Oleh karena itu, diperlukan metode analisis yang sensitif dan akurat untuk mendeteksi dan mengukur kadar BaP dalam makanan. Salah satu metode yang banyak digunakan adalah High Performance Liquid Chromatography (HPLC).

Prinsip Kerja Pengujian BaP

Metode HPLC bekerja berdasarkan pemisahan komponen dalam sampel berdasarkan perbedaan interaksi antara fase diam (kolom) dan fase gerak (pelarut). Dalam pengujian BaP, sampel makanan terlebih dahulu diekstraksi untuk mengambil senyawa PAH. Kemudian, ekstrak tersebut diinjeksikan ke dalam sistem HPLC. BaP akan terpisah dari senyawa lain di dalam kolom kromatografi dan dideteksi menggunakan detektor, biasanya fluorescence detector (FLD). Hasil analisis ditampilkan dalam bentuk kromatogram, di mana BaP dapat diidentifikasi berdasarkan waktu retensi dan dihitung kadarnya berdasarkan luas puncak.

Alat dan Bahan

Alat yang digunakan pada pengujian ini, yaitu:

• Sistem HPLC (pompa, injector, kolom, dan detektor UV-Vis)
• Kolom kromatografi C18
• Timbangan analitik
• Tabung sentrifugasi
• Pipet volumetrik dan mikropipet
• Labu ukur
• Vortex mixer
• Sonikator (ultrasonic bath)
• Syringe filter 0,2 µm
• Vial

Bahan yang digunakan pada pengujian ini, yaitu:

• Standar Benzo(a)pyrene
• Sampel makanan
• Fase gerak
• Larutan NaOH

Cara Kerja Pengujian BaP

Pembuatan fase gerak

1. Campuran pelarut methanol dan air (80:20).
2. Saring menggunakan vacuum filter, kemudian larutan ditampung dalam botol schott.
3. Lakukan degassing selama 30 menit.

Pembuatan kurva standar

1. Timbang standar BaP murni dan larutkan dengan pelarut di dalam labu takar.
2. Siapkan deret standar PAH konsentrasi 0.01, 0.05, 0.1,0. 5, 1 ppb.
3. Tambahkan pelarut methanol sampai tanda batas.
4. Saring setiap deret standar menggunakan filter membran 0,22 µm atau 0,45 µm
5. Injeksikan deret standar ke alat HPLC. Injeksikan pelarut methanol yang digunakan sebelum menginjek deret standar.

Preparasi sampel

1. Siapkan sampel makanan non minyak.
2. Timbang 5 g sampel ke dalam tabung sentrifugasi 50 mL.
3. Tambahkan NaOH 10 mL dan vortex untuk menghomogenkan.
4. Panaskan larutan sampai mendidih.
5. Dinginkan larutan
6. Tambahkan 10 mL larutan hexane ke dalam tabung sentrifugasi yang berisi larutan sampel yang telah dinginl.
7. Vortex larutan agar homogen dan sentrifugasi selama 5 menit.
8. Lapisan bawah adalah endapan sampel dan larutan NaOH dan lapisan atas adalah hexane.
9. Pisahkan lapisan hexane menggunakan pipet ke dalam labu lemak.
10. Ulangi proses ekstraksi lagi sebanyak 2x dengan 10 mL hexana untuk setiap ekstraksi.
11. Gabungkan ekstrak hexane dari ketiga ekstaksi tersebut.
12. Uapkan hasil ekstraksi di rotary evaporator pada suhu 60^oC.
13. Bilas labu lemak dengan hexane dan pindahkan ke dalam vial sambil disaring dengan menggunakan filter 0,45 µm untuk menghilangkan partikel pengganggu.
14. Injeksikan ke alat HPLC.

Penutup

Pengujian BaP pada makanan menggunakan HPLC merupakan metode yang efektif, sensitif, dan akurat untuk mendeteksi senyawa karsinogenik ini. Metode ini memungkinkan deteksi BaP dalam kadar rendah sehingga sangat penting dalam pengawasan keamanan pangan. Dengan penerapan metode analisis yang tepat, risiko paparan senyawa berbahaya seperti BaP dalam makanan dapat diminimalkan, sehingga kesehatan masyarakat dapat lebih terjamin. Oleh karena itu, analisis rutin terhadap kandungan BaP sangat penting dilakukan, terutama pada makanan yang diolah dengan suhu tinggi.

PT. Andaru Persada Mandiri adalah distributor alat laboratorium  High Performance Liquid Chromatography (HPLC), jika anda membutuhkan High Performance Liquid Chromatography (HPLC) bisa menghubungi kami di whatsapp 087777277740 atau telepon 0251-7504679. Link alamat kami sertakan pada Google Maps.

Demikian artikel “Pengujian BaP pada Makanan Menggunakan HPLC“, semoga bermanfaat. Sekian dan terima kasih.