Neutralizing Antibody – Mengenal Produk Neutralizing Antibody

Neutralizing Antibody – Tentu diantara para membaca awam masih kesulitan untuk memahami kata neutralizing antibody. Bahkan pertanyaan awal yang ada dibenak anda adalah apa itu neutralizing antibody? Dalam versi bahasa indonesia neutralizing antibody adalah antibodi penetralisir. Tentu kita tahu saat terinfeksi virus, tubuh akan memulai respon imun dengan memproduksi antibodi dalam darah. Antibodi penetral inilah yang kemudian diukur keberadaannya setelah seseorang terinfeksi virus atau diberikan vaksinasi. Adapun neutralizing antibody yang dimaksud pada tulisan ini adalah suatu produk yang reagen yang digunakan untuk mengukur kadar antibody penetral pada suatu sample.

Agar lebih mudah memahami produk neutralizing antibody, penulis memfokuskan pada satu produk SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit. Produk ini memang cukup langka digunakan baik di lingkungan rumah sakit maupun instansi lainnya. Namun tidak perlu khawatir, jika anda membutuhan produk neutralizing antibody bisa menghubungi customer service PT. Andaru Persada Mandiri via whatsapp : 087777277740 atau telepon : 0251-7504679. Informasi penting lainnya, selain menyediakan reagen neutralizing antibody PT. Andaru Persada Mandiri juga memiliki instrument microplate reader dan microplate washer yang memang digunakan dalam pemeriksaan antibodi. Berikut adalah gambar kemasan reagen neutralizing antibody:

Mengenal Produk Neutralizing Antibody

Setelah mengetahui box kemasan reagen neutralizing antibody pada gambar diatas, kira-kira seberapa besar ukurannya? Yap, ukurannya seukuran dengan box reagen pcr, dengan panjang 15cm, lebar 10cm dan tinggi 9cm. Dalam setiap box reagen neutralizing antibody ada sekitar 11 item yang terdiri dari:

1. RBD Coated Microplate – 1 plate
2. Calibrator (Ready-to-use) 1ml x 1vial
3. Positive control (Ready-to-use) 1ml x 1vial
4. Negative control (Ready-to-use) 1ml x 1vial
5. 100x Detector (ACE2-biotin) 110ul x 1vial
6. 100x SA-HRP 110ul x 1vial
7. 3x Assay buffer 15ml x 1bottle
8. TMB solution 12ml x 1bottle
9. Stop solution 6ml x 1bottle
10. 20x Wash buffer 30ml x 1bottle
11. Plate Covers 2pcs

Supaya anda tidak bingung dan menerka-nerka mana masing-masing item pada daftar diatas, silahkan lihat gambar dibawah ini yang sudah penulis berikan nomor.

Posisi peletakan setiap item pada box reagen neutralizing antibody tersusun dengan rapi, terdapat spons dengan ukuran lubang menyesuaikan ukuran botol-botol reagen. Berikut adalah gambar isi dus reagen neutralizing antibody tampak atas:

Topik pembahasan mengenal produk reagen neutralizing antibody secara umum sudah penulis sampaikan, point selanjutnya akan membahas hal-hal yang berhubungan dengan reagen neutralizing antibody. Yuk simak lebih lanjut!

Gambaran Umum Penggunaan Reagen Neutralizing Antibody

Dalam pemahaman yang sangat sederhana penggunaan reagen neutralizing antibody digunakan untuk mengukur keberadaan antibodi penetral pada individu yang telah pulih dari suatu infeksi atau telah dilakukan vaksinasi. Karena tadi penulis sudah fokus akan membahas SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit maka kasus inilah yang akan diulas lebih lanjut.

Versi yang sederhana dari proses pengecekan neutralizing antibody sering juga disebut test neutralizing antibody atau test deteksi neutralizing antibody atau hanya disingkat NAb.

Baca juga : Mengetahui Fungsi Microplate Reader

Test SARS-CoV-2 neutralizing antibody digunakan untuk mendeteksi antibodi yang menetralkan virus penyebab COVID-19. Antibodi ini biasanya muncul pada serum darah pasien COVID-19 pada 7 – 14 hari setelah terinfeksi. Proses mendeteksi NAb menggunakan materi tak aktif pada virus yang disebut pseudovirus. Tes deteksi NAb kemungkinan dapat memberikan informasi terkait kekuatan respons kekebalan tubuh terhadap virus, kekebalan kelompok, hingga efikasi vaksin. Prosedur ini juga berguna untuk menilai kekuatan daya tahan yang telah terbentuk.

Mengenal SARS-CoV-2 Secara Umum

Wabah Penyakit Coronavirus 2019 (COVID-19) telah menjadi ancaman kesehatan serius bagi seluruh masyarakat dunia. Di Indonesia sendiri kita sudah melewati pandemi lebih dari 1 tahun, mulai dari PSBB, penutupan tempat ibadah, mall dan hingga kini diberlakukan PPKM. Secara ilmiah(ilmu biomolekular) kunci untuk mengatasi pandemi ini adalah memahami mekanisme pengenalan reseptor virus, yang mengatur infektivitas, patogenesis, dan jangkauan inangnya. SARS-CoV-2 memiliki empat protein struktural utama, yakni:

1. Spike (S) glycoprotein
2. Small envelope (E) glycoprotein
3. Membrane (M) glycoprotein
4. Nucleocapsid (N)protein, serta beberapa protein aksesori lainnya.

Khususnya, protein S memiliki RBD (Receptor Binding Domain) yang terletak di sub unit S1 virus yang memfasilitasi masuknya virus ke dalam sel inang dengan mengikat reseptornya pada sel inang, ACE2.

Hubungan SARS-CoV-2 dan Neutralizing Antibody

Terjadinya infeksi SARS-CoV-2 memulai respon imun dengan melibatkan produksi antibodi dalam darah. Tidak semua antibodi yang dihasilkan mampu menghalangi penetrasi sel dan replikasi virus SARS-CoV-2. Antibodi penetralisir dapat secara efisien menghentikan infeksi dengan menghalangi interaksi antara virus SARS-CoV-2 dan sel inang. Sebagian besar antibodi penetralisir bereaksi terhadap reseptor binding domain (RBD) dari spike protein, yang secara langsung berikatan dengan reseptor permukaan sel ACE2. Produk neutralizing antibody detection kit mengukur keberadaan antibodi penetral dari pasien yang pulih dari COVID-19 atau mereka yang divaksinasi SARS-CoV-2

Kapan Waktu Ideal Pengukuran Neutralizing Antibody

Pembentukan antibodi terhadap SARS-CoV-2 biasanya dapat dideteksi dalam darah selama beberapa hari setelah infeksi awal, tetapi periode dimana antibodi menetralisir setelah infeksi tidak ditandai dengan baik. Antibodi penetral total SARS CoV-2 dapat dideteksi secara semi-kuantitatif melalui produk reagen neutralizing antibody SARS-CoV-2 detection kit. Produk ini dapat membantu mengidentifikasi individu dengan respons imun adaptif terhadap SARS-CoV-2 yang mengindikasikan infeksi baru atau infeksi sebelumnya.

Tahapan & Estimasi Waktu Penggunaan Neutralizing Antibody

Penggunaan reagen neutralizing antibody detection kit disertai protokol yang tepat dapat memangkas waktu analisas sample. Estimasi seluruh proses hanya membutuhkan waktu 1,5 hingga 2 jam saja. Berikut adalah 4 tahapan yang perlu dilakukan dalam proses pemeriksaan neutralizing antibody:

1. Sample (1/10 dilution)  sekitar 30 menit
2. ACE2 biotin conjugate sekitar 30 menit
3. Streptavidin-HRP sekitar 15 menit
4. TMB sekitar 15 menit

Interpretasi Hasil Pemeriksaan Neutralizing Antibody

Jika pada pemeriksaan swab pcr kita sering mendengar istilah cut off dan ct value. Nilai tersebut dijadikan acuan batas seorang individu dikategorikan terinfeksi covid19 atau tidak. Bagaimana saat pemeriksaan neutralizing antibody?

Batas positif dan negatif untuk mendeteksi antibodi penetralisir SARS-CoV-2 dapat menggunakan nilai interpretasi inhibition rate. Hasil dapat dievaluasi dengan menghitung rasio kontrol OD  atau sampel pasien terhadap kalibrator dari OD. Operator dapat menentukan hasil sampel dengan membandingkan rasio dengan rumus sebagai berikut:

Rasio	Result	Test Result
≥ 0.8	Negative	Tidak terdeteksi neutralizing antibody
< 0.8	Positive	Terdeteksi neutralizing antibody

Penyimpanan Reagen Neutralizing Antibody

Box reagen neutralizing antibody  yang belum dibuka bisa disimpan selama 12 bulan dari tanggal pembuatan pada suhu 2℃ hingga 8℃. Sedangkan reagen neutralizing antibody yang sudah dibuka bisa bertahan hingga 1 bulan dari tanggal pembukaan awal pada suhu yang sama. Itu artinya anda perlu menyiapkan refrigerator atau show case khusus untuk menyimpan reagen neutralizing antibody.

Teknis Pemeriksaan Neutralizing Antibody di Laboratorium

Beberapa pembaca meminta diberikan gambaran umum bagaimana teknis pemeriksaan neutralizing antibody. Pada kesempatan kali ini penulis memberikan hanya gambaran umumnya ya, karena hanya sempat melihat-lihat sekilas operator yang sedang bekerja dengan alat microplate reader. By the way, jika diantara sobat ada yang memang sering melakukan pemeriksaan antibodi atau lebih ahli dalam bidang ini bisa share pengalaman di kolom komentar ya.

Kelengkapan Alat & Consumable Pemeriksaan Neutralizing Antibody

Dalam proses pemeriksaan ketersediaan neutralizing antibody dalam suatu sample diperlukan instrumen utama, instrumen pendukung dan consumable atau bahan habis pakai. Berikut adalah daftar yang perlu disediakan:

• Alat microplate reader dengan kemampuan mengukur absorbansi 450nm.
• Microplate washer
• Micropipet
• Centrifuge
• Laboratory timer
• Reagen neutralizing antibody
• Deionized or distilled water
• Plastic container to store Wash Solution
• 96well U type plate to dilute samples
• Disposable reagent reservoir
• Graduated cylinders
• Paper towels, dll

Preparasi Reagen Neutralizing Antibody

Berikut ini adalah gambaran umum tahapan preparasi reagen untuk melakukan pengujian neutralizing antibody:

1. Atur atau setting microplate reader dengan nilai absorbansi 450nm.
2. Bawa semua reagen ke suhu ruang sebelum digunakan. Biarkan semua komponen minimal selama 15 menit dengan agitasi lembut setelah rekonstitusi awal. Pengenceran yang sudah dibuat atau disiapkan harus segera digunakan. Untuk persiapan semua reagen, siapkan cukup untuk beberapa wells tambahan untuk memperhitungkan kerugian proses pipetting.
3. 1x Assay buffer – Encerkan 15ml dari 3x Assay buffer konsentrat dengan 30ml air suling atau air deionisasi. Simpan buffer Assay encer pada 2 hingga 8°C. *Catatan : Setiap endapan yang disebabkan oleh suhu dingin dalam tabung dapat diamati, tetapi itu bukan cacat. Larutkan dengan baik (hingga 40°C) agar tidak mempengaruhi hasil saat diencerkan sebelum digunakan.
4. 1x Wash buffer – Encerkan 30ml dari 20x Wash buffer konsentrat dengan 570ml air suling atau air deionisasi. Simpan buffer Cuci yang diencerkan pada 2 hingga 8°C. *Catatan : Setiap endapan yang disebabkan oleh suhu dingin dalam tabung dapat diamati, tetapi itu bukan cacat. Larutkan dengan baik (hingga 40°C) agar tidak mempengaruhi hasil saat diencerkan sebelum digunakan.
5. 1x Detector – Encerkan 100x Detector dengan 1x Assay buffer dengan perbandingan volume 1:99 (pengenceran 100 kali lipat). Misalnya, untuk satu pengujian pelat sumur 96, encerkan 100ul Detektor 100x dengan 9,9ml buffer Assay 1x.
6. 1x SA-HRP – Encerkan 100x SA-HRP dengan 1x Assay buffer dengan perbandingan volume 1:99 (pengenceran 100 kali lipat). Misalnya, untuk satu pengujian pelat sumur 96, encerkan 100ul SA-HRP 100x dengan 9,9ml buffer Assay 1x.

Preparasi Sample Neutralizing Antibody

Encerkan sampel uji dengan 1x Assay buffer dengan perbandingan volume 1:9 (pengenceran 10 kali lipat). Misalnya: Encerkan 12ul sampel dengan 108ul buffer uji 1x dan aduk rata

Prosedur Pemeriksaan Neutralizing Antibody

Berikut ini adalah tahapan prosedur pemeriksaan neutralizing antibody yang mungkin perlu anda ketahui. Tahapan ini penulis ambil langsung dari dokumen IFU reagen neutralizing antibody:

1. Add 100ul each of the Calibrator, Positive control, Negative control, and diluted samples to the corresponding wells.
2. Positive control, Negative control, Calibrator recommend duplication tests for the accuracy of the test. Interpret the results as average values for the duplication test results.
3. Cover the plate with plate sealer and incubate at room temperature for 30 minutes.
4. Remove the plate sealer and wash the plate with 300ul of 1x Wash buffer of 3 times.
5. Pat the plate on paper towel to remove residual liquid in the wells after washing steps.
6. Add 100ul of diluted 1x Detector to each well. Incubate the plate for 30 minutes at room temperature. Cover with plate sealer.
7. Remove the plate sealer and wash the plate with 300ul of 1x Wash buffer of 3 times. Pat the plate on paper towel to remove residual liquid in the wells after washing steps.
8. Add 100ul of diluted 1x SA-HRP to each well. Incubate the plate for 15 minutes at room temperature. Cover with plate sealer.
9. Remove the plate sealer and wash the plate with 300ul of 1x Wash buffer of 3 times. Pat the plate on paper towel to remove residual liquid in the wells after washing steps.
10. Add 100ul of TMB solution to each well and incubate the plate in the dark at room temperature for 15 minutes.
11. Add 50ul Stop solution to each well to quench the reaction.
12. Read the absorbance in the microplate reader at 450 nm immediately

Instrument Pemeriksaan ELISA

Dalam proses pemeriksaan antibody dengan metode ELISA diperlukan instrument berupa microplate reader dan microplate washer. Berikut adalah gambaran kedua instrument tersebut:

Ditulis oleh : YAP

Bagi anda yang membutuhkan produk reagen neutralizing antibody bisa menghubungi CS PT. Andaru Persada Mandiri via whatsapp : 087777277740 atau telepon : 0251-7504679. Link alamat jika ingin berkunjung langsung penulis sertakan pada googlemaps. Selain menjual reagen neutralizing antibody, microplate reader, microplate washer terdapat pula produk lainnya seperti alat genose c19, mesin pcr, mesin ekstraksi rna lengkap dengan reagen-reagen pendukungnya.

Demikian pembahasan mengenai mengenal produk neutralizing antibody. Kita sudah membahas mengenai gambaran penggunaan reagen neutralizing antibody, hubungan covid19 dengan neutralizing antibody, kapan waktu ideal pengujian neutralizing antibody, tahapan & estimasi waktu penggunaan reagen neutralizing antibody, cara membaca interpretasi reagen neutralizing antibody, penyimpanan reagen neutralizing antibody, teknis pemeriksaan neutralizing antibody, alat & consumable pemeriksaan neutralizing antibody, preparasi sample & reagen neutralizing antibody hingga prosedur pemeriksaan neutralizing antibody. Semoga artikel ini bisa membantu para pembaca awam. Jika diantara anda yang lebih ahli dalam bidang pemeriksaan neutralizing antibody, boleh share pengalamannya di kolom komentar. Sekian dan tentu saja terima kasih.